PCR技術(shù)誕生至今,隨著生命科學(xué)領(lǐng)域以及延伸領(lǐng)域的應(yīng)用需求,PCR技術(shù)已經(jīng)經(jīng)過了三代突破性的更迭,使其應(yīng)用范圍越來越廣泛。下面就給大家介紹關(guān)于PCR技術(shù)的原理以及用途的內(nèi)容,歡迎閱讀!
PCR技術(shù)的原理:
聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng),Polymerase Chain Reaction (PCR),簡單來講,其就是利用DNA分子會在體外95°高溫時會發(fā)生變性解旋變成單鏈,然后降溫到60°C左右時引物會與單鏈DNA按堿基互補(bǔ)配對原則結(jié)合,接著再升高溫度到72°C左右,即DNA聚合酶適合反應(yīng)溫度,DNA聚合酶會沿著磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成相應(yīng)的互補(bǔ)鏈,如此循環(huán)往復(fù)以達(dá)到DNA分子擴(kuò)增的目的。
PCR技術(shù)的主要用途:
1.核酸基礎(chǔ)研究:基因組克隆。
2.DNA測序采用不對稱PCR制備單鏈DNA。
3.反向PCR測定未知DNA區(qū)域。
4.反轉(zhuǎn)錄PCR(RT-PCR)用于檢測細(xì)胞中的基因表達(dá)水平、RNA病毒量和直接克隆特定基因的CDNA。
5.熒光定量PCR用于實時監(jiān)控PCR產(chǎn)品。
6.CDNA終端快速擴(kuò)增技術(shù)。
7.檢測基因的表達(dá)。
8.醫(yī)學(xué)應(yīng)用:檢測細(xì)菌疾病的檢測;遺傳病的診斷;腫瘤的診斷;用于法醫(yī)物證。
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